Kẻ Cắp Mặt Trăng - Despicable Me kể về Gru - một trong những tên tội phạm khét tiếng nhất thế giới. Gru lúc nào cũng muốn làm việc xấu xa và sẵn sàng gạt bỏ những kẻ ngáng đường đi của hắn. Sống trong một ngôi nhà tối tăm ở vùng ngoại ô thành phố, Gru xây dựng căn cứ bí mật nằm sâu dưới lòng đất cùng những kẻ tay sai tý hon màu vàng. Hắn còn sở hữu một kho đồ chơi công nghệ với nhiều vũ khí và máy móc hiện đại. Nhận thấy có nhiều kẻ tội phạm mới nổi danh hơn mình, Gru quyết định thực hiện âm mưu vĩ đại nhất thế kỷ: đánh cắp mặt trăng. Với sự giúp đỡ của tiến sĩ Nefario và đội quân tý hon màu vàng, Gru bắt đầu triển khai mọi việc. Tuy nhiên, kế hoạch của hắn bị cản trở bởi sự xuất hiện của Vector - một tên tội phạm mới nổi. Mặt khác, Gru còn phải đương đầu với ba đứa trẻ mồ côi tinh nghịch. Ba cô bé Margo, Edith và Agnes làm xáo trộn toàn bộ cuộc sống và con người của Gru. Chúng đã giúp Gru nhận thấy một điều ở chính bản thân mà trước đây hắn chưa từng biết: tiềm năng trở thành một người cha vĩ đại. Gru đứng giữa hai sự lựa chọn giữa cái thiện và cái ác...